本发明公开了一种重组肝靶向干扰素的制备工艺。本发明对整合有重组肝靶向干扰素基因的原核工程菌发酵条件进行优化，然后破菌提取包涵体、洗涤、变性溶解、梯度透析复性、重组Enterokinase酶切、HisTrap HP柱和HiTrap HeparinHP柱组合纯化，制备得到药用重组肝靶向干扰素。本发明通过变性、透析复性后得到的融合蛋白Trx-His-IFN-CSP的纯度可达到95%以上，无需融合蛋白的过柱纯化过程，减少处理步骤中可能的污染与损失；另外，本发明将标签蛋白切除后得到的重组肝靶向干扰素完全忠实于原始设计，有助于减少未知的用药风险；最后，通过肝素亲和层析再次纯化，无需去内毒素过程，简化了工艺，减少了损失。

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